PEPCK-M/PCK2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400725-NIC

Il gene umano **PCK2** codifica l’isoforma mitocondriale della fosfoenolpiruvato carbossichinasi (PEPCK-M), un enzima gluconeogenico e anaplerotico fondamentale che converte l’ossalacetato in fosfoenolpiruvato, collegando gli intermedi del ciclo TCA alle vie biosintetiche citosoliche. Modulando il flusso di carbonio tra compartimenti mitocondriali e citosolici, PCK2 influenza il metabolismo di glucosio e lipidi, l’equilibrio redox e l’utilizzo degli amminoacidi in condizioni di stress nutrizionale. L’attività di PCK2 si interseca con vie che governano l’adattamento metabolico, inclusi gluconeogenesi, cataplerosi e le reti della serina/glicina e della gliceroneogenesi. Un’espressione o una funzione disregulated di PCK2 è stata associata a stati metabolici alterati osservati nel metabolismo tumorale, nella resistenza all’insulina e in altri disturbi caratterizzati da perturbazioni dell’omeostasi mitocondriale e del glucosio.

PEPCK-M/PCK2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PCK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PCK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PCK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PCK2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.