Particules Lentivirales d'Activation (h2) Pendrin: sc-401272-LAC-2

Le gène humain SLC26A4 code la pendrine, un échangeur d’anions multipasse qui assure un transport électroneutre du chlorure, de l’iodure, du bicarbonate et de substrats apparentés à travers les membranes épithéliales. La pendrine contribue à l’homéostasie ionique et du pH dans l’oreille interne, la thyroïde et le tube collecteur rénal, en modulant la composition de l’endolymphe, la gestion de l’iodure lors de la biosynthèse des hormones thyroïdiennes et la sécrétion de bicarbonate couplée à la réabsorption du chlorure. Les altérations génétiques de SLC26A4 sont fortement associées au syndrome de Pendred ainsi qu’à des surdités syndromiques ou non syndromiques avec aqueduc vestibulaire élargi, ce qui souligne son rôle dans la physiologie du transport épithélial et le développement des organes sensoriels. L’édition du gène SLC26A4 offre un système accessible pour disséquer les mécanismes d’échange d’anions, la polarité et le trafic épithéliaux, ainsi que les relations génotype–phénotype dans des modèles cellulaires d’organoïdes, de rein, de thyroïde ou d’oreille interne.

Les particules d'activation lentivirales Pendrin (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SLC26A4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Pendrin (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SLC26A4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Pendrin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SLC26A4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.