Peg10 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-431278-LAC

Peg10 de camundongo (gene 10 expresso paternalmente) codifica uma proteína semelhante a Gag/Pol derivada de um retrotransposon domesticado, que é submetida a imprinting e essencial para o desenvolvimento placentário e a diferenciação de trofoblastos. PEG10 participa de redes de ligação a RNA e de interações proteína–proteína que influenciam a sobrevivência celular, a proliferação e programas de linhagem, e tem sido associada a vias que regulam a transição epitélio–mesênquima, a degradação mediada por ubiquitina e processos relacionados à autofagia. A expressão desregulada de PEG10 foi relatada em múltiplos contextos de câncer e em estados de remodelamento tecidual, tornando-a um nó útil para estudar o controle do crescimento e programas transcricionais adaptativos ao estresse. Em modelos murinos, Peg10 é frequentemente investigado por seus papéis na regulação gênica do desenvolvimento, na biologia do imprinting e em dependências de sinalização oncogênica.

As Partículas de Ativação Lentivirais Peg10 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Peg10 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Peg10 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Peg10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Peg10. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Peg10 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.