Plasmide CRISPR/Cas9 KO PEBP2β (h): sc-401983

Présentation

CBFB code la sous-unité bêta du facteur core-binding (PEBP2β), un partenaire ne se liant pas à l’ADN qui s’hétérodimérise avec les facteurs de transcription RUNX afin de stabiliser la liaison à l’ADN et de coordonner des programmes d’expression génique contrôlant la différenciation hématopoïétique, l’ostéogenèse et le développement des cellules immunitaires. Au travers de ce complexe RUNX/CBF, CBFB contribue à réguler des voies impliquées dans l’engagement du destin cellulaire, la prolifération et des réseaux transcriptionnels spécifiques de lignée. La perturbation de la transcription dépendante de CBFB est impliquée dans une hématopoïèse aberrante et des anomalies du développement, et CBFB est fréquemment étudié dans le contexte de réarrangements chromosomiques et de dérégulation transcriptionnelle dans des modèles de maladies hématologiques. Ces propriétés font de CBFB un nœud clé pour étudier la coopérativité entre facteurs de transcription, la régulation des enhancers et les mécanismes de spécification de lignée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PEBP2β (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CBFB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CBFB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CBFB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PEBP2β.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CBFB pour l'étude de la signalisation de PEBP2β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CBFB essentiels à la fonction de PEBP2β
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CBFB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PEBP2β plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PEBP2β plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CBFB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PEBP2β plasmide HDR (h) et le PEBP2β (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CBFB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CBFB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.