PDI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422099

Übersicht

P4hb kodiert die Proteindisulfid-Isomerase (PDI), eine im endoplasmatischen Retikulum reichlich vorhandene Oxidoreduktase, die die Bildung, Reduktion und Isomerisierung von Disulfidbrücken katalysiert und so die Faltung und Reifung sekretorischer und membranständiger Proteine unterstützt. PDI wirkt in Netzwerken der ER-Proteostase, arbeitet mit Chaperonen und Oxidoreduktasen zusammen, um die oxidative Proteinfaltung und Qualitätskontrolle zu regulieren, und trägt zur ER-Stress-Signalgebung sowie zu Signalwegen der Unfolded-Protein-Response (UPR) bei. Über seine Thiol-Disulfid-Austauschaktivität und die Interaktion mit fehlgefalteten Substraten beeinflusst PDI die Redox-Homöostase, den Proteintransport und Entscheidungen über das Zellüberleben unter proteotoxischem Stress. Eine fehlregulierte P4hb/PDI-Aktivität wurde mit pathologischen Zuständen in Verbindung gebracht, die durch chronischen ER-Stress und ein verändertes Redox-Gleichgewicht gekennzeichnet sind, was PDI zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien in Modellen der Neurodegeneration, metabolischer Dysfunktion und Krebsbiologie macht.

Das PDI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des P4hb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des P4hb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von P4hb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PDI-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von P4hb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PDI-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf P4hb-Exone abzielen, die für die PDI-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere P4hb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PDI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PDI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des P4hb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PDI HDR-Plasmid (m) und PDI HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von P4hb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten P4hb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.