PBR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401624-ACT

A proteína translocadora TSPO, também conhecida como receptor benzodiazepínico periférico (PBR), é uma proteína da membrana externa da mitocôndria implicada no transporte de colesterol, na esteroidogénese e na regulação da bioenergética mitocondrial. A TSPO influencia a homeostase de espécies reativas de oxigénio, a transição de permeabilidade mitocondrial e a sinalização apoptótica, ligando-a a respostas ao stress celular e a programas inflamatórios. Em células imunitárias e gliais, a expressão de TSPO correlaciona-se com o estado de ativação e com a remodelação mitocondrial, tornando-a um marcador molecular amplamente utilizado na investigação de neuroinflamação. A atividade ou expressão desregulada de TSPO/PBR tem sido associada a alterações da função mitocondrial em perturbações neurológicas, à reprogramação metabólica associada ao cancro e a patologias inflamatórias, sustentando estudos mecanísticos sobre sinalização mitocondrial e destino celular.

PBR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TSPO sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PBR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TSPO em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TSPO, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PBR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TSPO nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PBR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PBR em células tumorais com expressão de TSPO silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.