PBGD Double Nickaseプラスミド (h): sc-404924-NIC

ヒトのHMBSは、ヘム生合成においてポルフォビリノーゲンを重合してヒドロキシメチルビランへと変換する細胞質酵素、ポルフォビリノーゲンデアミナーゼ（PBGD）をコードする。この段階は、ミトコンドリア呼吸、シトクロムの機能、ならびに赤芽球系・非赤芽球系組織における酸素の取り扱いに必要なヘムの産生を支える。HMBS活性はポルフィリン代謝および細胞のレドックス恒常性と統合され、ヘムの利用可能性を酸化ストレス応答や代謝適応と結び付ける。HMBSの遺伝学的または機能的な攪乱は、ポルフィリン経路のフラックス異常と関連し、急性肝性ポルフィリン症や赤芽球系におけるヘム制御の研究において重要である。

PBGD ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HMBS 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HMBS内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HMBSの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HMBSが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。