PASK Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-435323-ACT

O gene **Pask** de camundongo codifica a quinase serina/treonina com domínio PAS (PASK), um sensor metabólico que integra sinais de nutrientes e de energia com o controle transcricional e pós-traducional. A PASK participa de redes de sinalização ligadas à homeostase da glicose, à função mitocondrial e à regulação da síntese proteica, com conexões descritas com processos relacionados ao mTOR e com a adaptação responsiva ao estresse. Em diversos tipos celulares, a atividade da PASK pode influenciar programas de proliferação e diferenciação ao modular a fosforilação de efetores a jusante e os resultados transcricionais. A desregulação da sinalização de PASK tem sido associada a fenótipos metabólicos e endócrinos, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de sinalização da insulina, metabolismo de lipídios e balanço energético celular.

PASK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pask sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PASK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pask em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pask, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PASK. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pask nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PASK no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PASK em células tumorais com expressão de Pask silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.