PARP-14 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-436859-ACT

Das murine Gen *Parp14* kodiert PARP-14 (ARTD8), eine Mono-ADP-Ribosyltransferase, die die Proteinfunktion durch ADP-Ribosylierung moduliert und als regulatorisches Gerüst in signalabhängiger Transkription dient. PARP-14 ist an zytokingesteuerten Signalwegen beteiligt, einschließlich IL-4/STAT6-assoziierter Programme, und trägt zur Kontrolle der Differenzierung von Immunzellen, der Expression entzündungsrelevanter Gene sowie zellulärer Stressantworten bei. Über Interaktionen mit Transkriptionsregulatoren und chromatinassoziierten Komplexen kann PARP-14 metabolische und Überlebens-Signalausgänge beeinflussen, die für Modelle von Allergie, Autoimmunität und tumorassoziierter Immunität relevant sind. Diese Eigenschaften machen *Parp14* zu einem nützlichen Ziel, um die ADP-Ribosylierungs-abhängige Regulation von Gennetzwerken in Makrophagen, B-Zellen, T-Zellen und anderen immunrelevanten Maus-Systemen zu untersuchen.

PARP-14 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Parp14-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PARP-14 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Parp14-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Parp14-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PARP-14-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Parp14-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PARP-14-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PARP-14-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Parp14-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.