PARD6G CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403179-ACT

PARD6G kodiert ein menschliches Gerüstprotein der PAR-6-Familie, das zusammen mit PAR3 und atypischer PKC am apikal gelegenen Polaritätskomplex beteiligt ist und die Etablierung sowie Aufrechterhaltung der Polarität epithelialer Zellen koordiniert. Über Interaktionen, die die Bildung von Tight Junctions, die Organisation des Zytoskeletts und die asymmetrische Zellteilung beeinflussen, trägt PARD6G zu einer regulierten Gewebearchitektur und gerichtetem Zellverhalten bei. Störungen in Polaritätswegen können die Integrität von Zell-Zell-Kontakten und Signalkaskaden beeinträchtigen, die Proliferation und Differenzierung steuern, wodurch PARD6G für Untersuchungen zur epithelialen Organisation und transformationsassoziierten Phänotypen relevant ist. Eine veränderte Regulation von Komponenten des PAR-Komplexes wird zudem in Kontexten wie Migrations- und Invasionsbiologie untersucht, in denen Polaritätsumbau mit Rho-GTPase- und Junction-Signalisierung zusammenwirkt.

PARD6G Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PARD6G-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PARD6G Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PARD6G-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PARD6G-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PARD6G-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PARD6G-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PARD6G-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PARD6G-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PARD6G-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.