Plasmide CRISPR/Cas9 KO Paralemmin (m): sc-422109

Présentation

Palm code la paralemmine, une phosphoprotéine associée aux membranes et enrichie dans les neurones, qui régule la dynamique de la membrane plasmique, la formation de filopodes et l’extension des neurites grâce à un échafaudage ancré aux lipides au niveau du cortex cellulaire. La paralemmine participe au remodelage du cytosquelette et aux processus de maturation synaptique qui façonnent la connectivité neuronale et la plasticité dépendante de l’activité. Chez la souris, l’expression de Palm est liée à la mise en place développementale des prolongements neuronaux et à l’organisation des épines dendritiques, la reliant à des voies contrôlant le trafic membranaire, le remodelage de l’actine et la structure synaptique. Une architecture membranaire et synaptique associée à la paralemmine et dérégulée a été étudiée dans le contexte de phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, où l’altération de la connectivité et de la morphologie des épines constitue des lectures expérimentales courantes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Paralemmin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Palm dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Palm, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Palm à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Paralemmin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Palm pour l'étude de la signalisation de Paralemmin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Palm essentiels à la fonction de Paralemmin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Palm pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Paralemmin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Paralemmin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Palm. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Paralemmin plasmide HDR (m) et le Paralemmin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Palm pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Palm définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.