PAR-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420267

Übersicht

Das Mausgen **F2rl3** kodiert den proteaseaktivierten Rezeptor 4 (**PAR-4**), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der durch Serinproteasen wie Thrombin über die proteolytische Freilegung eines „tethered ligand“ (gebundenen Liganden) aktiviert wird. PAR-4 koppelt vor allem an **Gq**- und **G12/13**-Signalwege und bewirkt dadurch eine intrazelluläre **Ca2+**-Mobilisierung, eine **RhoA/ROCK**-abhängige Zytoskelett-Remodellierung sowie nachgeschaltete Antworten der **MAPK**- und **NF-κB**-Signalwege, die Thrombozytenaktivierung, inflammatorische Signalübertragung und vaskuläre Homöostase prägen. In immunologischen und vaskulären Kontexten trägt die Aktivität von F2rl3/PAR-4 zur Zelladhäsion und Barriere-Regulation bei und wird häufig in Modellen für Thrombose, Entzündung und kardiometabolischen Stress untersucht. Veränderte PAR-4-Signalgebung wurde zudem mit tumorgebundenen Hinweisen aus dem Mikromilieu in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für mechanistische Studien zur Wechselwirkung zwischen Hämostase und Entzündung unterstreicht.

Das PAR-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des F2rl3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des F2rl3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von F2rl3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PAR-4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von F2rl3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PAR-4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf F2rl3-Exone abzielen, die für die PAR-4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere F2rl3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PAR-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PAR-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des F2rl3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PAR-4 HDR-Plasmid (m) und PAR-4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von F2rl3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten F2rl3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.