PAPP-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406222

Übersicht

PAPPA kodiert das pregnancy-associated plasma protein A (PAPP-A), eine sekretierte Metalloproteinase aus der Pappalysin-Familie, die die Bioverfügbarkeit insulinähnlicher Wachstumsfaktoren (IGF) reguliert, indem sie IGF-bindende Proteine spaltet, insbesondere IGFBP4 und IGFBP5. Durch die Erhöhung des lokal verfügbaren freien IGF moduliert PAPP-A IGF1R-gesteuerte Signalwege wie PI3K–AKT und MAPK/ERK und beeinflusst damit Zellproliferation, Differenzierung und Überleben in Kontexten des Gewebeumbaus. Die Aktivität von PAPP-A ist zudem mit extrazellulärmatrixnaher Proteolyse und der parakrinen Regulation von Wachstumsfaktorsignalen in vaskulären und stromalen Mikroumgebungen verknüpft. Eine fehlregulierte PAPPA-Expression oder -Aktivität wurde mit der Plazentabiologie, der Biologie atherosklerotischer Plaques und entzündlichen kardiometabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was mechanistische Studien zur Kontrolle der IGF-Achse in krankheitsrelevanten Zelltypen motiviert.

Das PAPP-A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PAPPA-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PAPPA-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PAPPA nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PAPP-A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PAPPA-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PAPP-A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PAPPA-Exone abzielen, die für die PAPP-A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PAPPA-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PAPP-A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PAPP-A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PAPPA-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PAPP-A HDR-Plasmid (h) und PAPP-A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PAPPA-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PAPPA-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.