PAO CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432791

Übersicht

Das Mausgen **Smox** kodiert die Polyaminoxidase (PAO), ein flavinabhängiges Enzym, das die Rückumwandlung von Polyaminen katalysiert und so zur Homöostase von Spermine und Spermidin beiträgt sowie den intrazellulären Polyaminfluss reguliert. Die PAO-Aktivität verknüpft den Polyaminstoffwechsel über die Bildung von Wasserstoffperoxid und reaktiven Aldehyden mit dem zellulären Redoxgleichgewicht und beeinflusst dadurch Antworten auf oxidativen Stress, die mitochondriale Funktion und entzündliche Signalwege. Eine veränderte Regulation von SMOX/PAO wurde mit entgleister Proliferation, erhöhter Anfälligkeit für DNA-Schäden und Gewebeschädigungen in Zusammenhängen assoziiert, in denen Polyaminumsatz und ROS-Signalgebung zusammenwirken, darunter in der Krebsbiologie und in Modellen der Neuroinflammation. Als metabolischer Knotenpunkt bietet PAO einen mechanistischen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie der Polyaminabbau Zellschicksalsentscheidungen und stressadaptive Signalwege moduliert.

Das PAO CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Smox-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Smox-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Smox nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PAO-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Smox-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PAO-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Smox-Exone abzielen, die für die PAO-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Smox-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PAO CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PAO CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Smox-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PAO HDR-Plasmid (m) und PAO HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Smox-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Smox-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.