p73 Double Nickase Plasmid (m2): sc-423511-NIC-2
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das p73 Double Nickase Plasmid (m2) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- p73 Double-Nickase-Plasmid (m2) und p73 Double-Nickase-Plasmid (m22) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Trp73 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: p73: sc-56191
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
p73 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423511-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen Trp73 kodiert p73, einen Transkriptionsfaktor der p53-Familie, der Programme zur Kontrolle von Zellzyklusarrest, Apoptose und genomischer Stabilität reguliert, indem er in einem kontextabhängigen Prozess Zielgene aktiviert, die an DNA-Schadensantworten beteiligt sind. p73 trägt außerdem zu Entwicklungsprozessen bei, darunter Neurogenese und epitheliale Differenzierung, und ist in Signalnetzwerke eingebunden, etwa in die E2F-gesteuerte Transkription, die TGF-β-assoziierte Regulation und stressaktivierte Kinasewege. Eine Fehlregulation des Gleichgewichts der Trp73-Isoformen und der p73-vermittelten Transkription wurde mit veränderten Tumorsuppressorfunktionen, chromosomaler Instabilität und Defekten der Gewebehomöostase in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und Entwicklungsphänotypen relevant sind. Die Geneditierung von Trp73 in Mausmodellen ermöglicht mechanistische Untersuchungen isoformspezifischer Funktionen, transkriptioneller Schaltkreise und der Wechselwirkungen zwischen Signalwegen, die Stressantworten und krankheitsassoziierte zelluläre Zustände zugrunde liegen.
p73 Das Double-Nickase-Plasmid (m2) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Trp73-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Trp73 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Trp73-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Trp73-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.