Plasmide CRISPR/Cas9 KO p57 Kip2 (h): sc-400444

Présentation

CDKN1C code pour p57^Kip2, un inhibiteur de kinases dépendantes des cyclines (CDK) de la famille CIP/KIP qui freine l’activité des CDK afin d’imposer un arrêt du cycle cellulaire en phase G1 et de favoriser la différenciation terminale. p57^Kip2 intègre des signaux du développement et du contrôle de la croissance via la régulation des complexes cycline–CDK, et se connecte à des points de contrôle qui coordonnent la prolifération avec la spécification des lignages. Le gène est soumis à empreinte parentale et sensible au dosage, ce qui rend son expression étroitement régulée durant l’embryogenèse, dans la biologie placentaire et dans l’homéostasie tissulaire. La dérégulation de CDKN1C est associée à des troubles de croissance liés à l’empreinte et a été étudiée dans des contextes où une altération du contrôle du cycle cellulaire et de la différenciation contribue à des phénotypes pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO p57 Kip2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDKN1C dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDKN1C, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDKN1C à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine p57 Kip2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDKN1C pour l'étude de la signalisation de p57 Kip2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CDKN1C essentiels à la fonction de p57 Kip2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDKN1C pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le p57 Kip2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le p57 Kip2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDKN1C. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le p57 Kip2 plasmide HDR (h) et le p57 Kip2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDKN1C pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDKN1C définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.