p57 Kip2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400444-ACT
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- p57 Kip2 CRISPR Activation Plasmid (h) ist ein Transkriptionsaktivierungs System (SAM) welches für die gezielte Verstärkung der Genexpression bestimmt ist
- p57 Kip2 CRISPR Aktivierungsplasmide (h) bestehen aus 3 Plasmiden im Massenverhältnis 1:1:1: ein Plasmid kodiert für die deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungsdomaine VP64 sowie ein Gen für die Blasticidin Resistenz; ein zweites Plasmid kodierend für das MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein sowie ein Gen für die Hygromycin Resistenz; ein drittes Plasmid kodierd für die Ziel-spezifische 20 nt guide RNA fusioniert an zwei MS2 RNA Aptamere sowie ein Gen für die Puromycin Resistenz.
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die vom p57 Kip2 CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) und vom p57 Kip2 CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen stromaufwärts der CDKN1C-Transkriptionsstartstelle ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: p57 Kip2: sc-56341
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
p57 Kip2 CRISPR Activation Plasmid (h) | sc-400444-ACT | 20 µg | $397.00 |
CDKN1C kodiert p57^Kip2, einen geprägten (imprinted) cyclinabhängigen Kinaseinhibitor der CIP/KIP-Familie, der die Aktivität von CDK2 und CDK1 hemmt, um einen G1-Arrest durchzusetzen und Differenzierungsprogramme zu koordinieren. p57^Kip2 integriert Signale aus Entwicklungs- und Wachstumsfaktorwegen, darunter Eingänge aus der TGF-β/SMAD-Signalgebung und der PI3K–AKT-Achse, um Zellzyklus-Checkpoints, Linienfestlegung und die Kontrolle des Gewebewachstums zu modulieren. Eine fehlregulierte CDKN1C-Expression sowie Prägungsdefekte sind mit abweichender Proliferation und Entwicklungsstörungen verknüpft, und veränderte p57^Kip2-Spiegel werden häufig in Kontexten wie Krebsbiologie, Stammzell-Quieszenz und Plazentaentwicklung untersucht. Als nukleärer Regulator der Proliferation ist p57^Kip2 außerdem relevant für die epigenetische Regulation im 11p15-Imprinting-Cluster sowie für Signalwege, die Seneszenz und Zellschicksalsübergänge steuern.
p57 Kip2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDKN1C-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.
p57 Kip2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDKN1C-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.
Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDKN1C-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen p57 Kip2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDKN1C-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von p57 Kip2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des p57 Kip2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDKN1C-Ausdruck.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.