Particules Lentivirales d'Activation (m) p54/nrb: sc-424729-LAC

La souris Nono code p54/nrb (NONO), une protéine nucléaire multifonctionnelle liant l’ARN et l’ADN, appartenant à la famille DBHS. Elle forme des hétérodimères avec SFPQ/PSPC1 pour organiser les paraspeckles et coordonner la transcription, l’épissage du pré-ARNm et la rétention des ARN. p54/nrb participe à la réponse aux dommages de l’ADN et à la réparation, notamment via des rôles dans la jonction d’extrémités non homologues, et contribue à coupler la transcription dépendante de la signalisation au traitement de l’ARN grâce à des interactions avec des complexes associés à l’ARN polymérase II. En régulant des programmes d’expression génique contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et les réponses au stress, une activité altérée de NONO a été associée à l’instabilité du génome et à des réseaux transcriptionnels aberrants pertinents pour le cancer et des phénotypes neurodéveloppementaux. En tant que plateforme d’assemblages ribonucléoprotéiques, p54/nrb influence également la dynamique des corps nucléaires et la régulation médiée par les longs ARN non codants, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de l’organisation nucléaire.

Les particules d'activation lentivirales p54/nrb (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Nono dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales p54/nrb (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Nono, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de p54/nrb. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Nono ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.