Plasmide Double Nickase (r) p53: sc-437318-NIC
- Espèces cibles: rat
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (r) p53 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide p53 Double Nickase (r) et le plasmide p53 Double Nickase (r2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant . Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (r) p53 | sc-437318-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (r2) p53 | sc-437318-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le p53 du rat est un facteur de transcription suppresseur de tumeur central, qui protège l’intégrité du génome en coordonnant la détection des dommages à l’ADN avec l’arrêt du cycle cellulaire, la sénescence et l’apoptose. Après un stress génotoxique, p53 intègre des signaux issus des voies ATM/ATR et CHK1/CHK2 afin de moduler des programmes transcriptionnels contrôlant les points de contrôle, la réparation de l’ADN et la signalisation apoptotique mitochondriale. Son activité est étroitement régulée par une rétroaction négative avec MDM2/MDM4 et façonnée par des modifications post-traductionnelles qui ajustent sa stabilité et la sélectivité de ses promoteurs. La perturbation de la surveillance dépendante de p53 est fortement associée à la transformation oncogénique, à une tolérance au stress modifiée, ainsi qu’à des réponses inflammatoires et métaboliques dérégulées dans des modèles pertinents pour la maladie.
p53 Le plasmide double nickase (r) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de . Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de . En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de .
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.