P4HA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405566

Übersicht

P4HA2 kodiert die katalytische Alpha-2-Untereinheit der Prolyl-4-Hydroxylase, eines zentralen Enzyms des endoplasmatischen Retikulums, das für die Hydroxylierung von Prolinresten in Kollagen und anderen Proteinen der extrazellulären Matrix erforderlich ist. Diese posttranslationale Modifikation fördert die korrekte Faltung und Stabilität der Tripelhelix und verknüpft die P4HA2-Aktivität mit der Kollagenbiosynthese, der Proteinqualitätskontrolle im ER und der Organisation der extrazellulären Matrix. Aufgrund seiner Rolle bei Matrixablagerung und -remodellierung wird P4HA2 häufig in Signalwegen untersucht, die mit Zell–Matrix-Interaktionen, Gewebesteifigkeit und der mikroumgebungsabhängigen Regulation des Zellverhaltens verbunden sind. Eine dysregulierte P4HA2-Expression wurde mit fibrotischem Umbau und tumorassoziierten Stromaveränderungen in Verbindung gebracht und macht P4HA2 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien matrixgetriebener Phänotypen.

Das P4HA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des P4HA2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des P4HA2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von P4HA2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die P4HA2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von P4HA2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der P4HA2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf P4HA2-Exone abzielen, die für die P4HA2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere P4HA2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom P4HA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom P4HA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des P4HA2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das P4HA2 HDR-Plasmid (h) und P4HA2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von P4HA2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten P4HA2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.