Plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y9 (m): sc-429620

Présentation

Lpar4 code le récepteur purinergique P2Y9, un récepteur couplé aux protéines G impliqué dans une signalisation médiée par des nucléotides/lipides extracellulaires, qui influence la communication cellulaire, des cascades de seconds messagers à proximité de la membrane, ainsi qu’une régulation — dépendante du contexte — de la motilité et de la différenciation. Dans les systèmes murins, la signalisation de la famille P2Y converge fréquemment vers des voies contrôlant la dynamique du calcium intracellulaire, l’équilibre de l’AMPc et des réseaux de kinases en aval qui coordonnent le remodelage du cytosquelette et les réponses transcriptionnelles. L’activité de Lpar4/P2Y9 est donc pertinente pour les études sur le trafic des cellules immunitaires, le dialogue stroma–épithélium et l’homéostasie tissulaire. La dérégulation de la signalisation purinergique portée par les GPCR a été associée à des phénotypes inflammatoires et fibrotiques ainsi qu’à une altération des signaux de croissance, faisant de Lpar4 un nœud utile pour l’exploration mécanistique des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y9 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lpar4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lpar4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lpar4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine P2Y9.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lpar4 pour l'étude de la signalisation de P2Y9, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lpar4 essentiels à la fonction de P2Y9
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lpar4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le P2Y9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le P2Y9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lpar4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le P2Y9 plasmide HDR (m) et le P2Y9 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lpar4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lpar4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.