P2Y7 Double Nickase Plasmid (h): sc-403664-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das P2Y7 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- P2Y7 Double-Nickase-Plasmid (h) und P2Y7 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LTB4R abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
P2Y7 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403664-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
P2Y7 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403664-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LTB4R kodiert den Leukotrien‑B4‑Rezeptor 1 (BLT1), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der Signale von Leukotrien B4 weiterleitet und dadurch PLCβ/Ca2+-Flüsse, MAPK‑Kaskaden sowie PI3K‑abhängige chemotaktische Programme in myeloiden und anderen Immunzellen aktiviert. Die BLT1‑Signalgebung koordiniert Leukozytenadhäsion, Migration und Degranulation und verknüpft damit die Wahrnehmung von Lipidmediatoren mit der Regulation entzündlicher Netzwerke. Eine fehlregulierte LTB4R‑Aktivität wurde in verschiedenen Krankheitskontexten mit chronisch‑entzündlichen Phänotypen und immunvermittelten Gewebeschäden in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz als Zielstruktur für mechanistische Studien zu Leukotrien‑Signalwegen stützt. In der biomedizinischen Forschung ermöglicht die Perturbation von LTB4R die Untersuchung GPCR‑getriebener Zellwanderung, Zytokinfreisetzung sowie des Crosstalks mit dem Eicosanoid‑Stoffwechsel und der angeborenen Immunsignalgebung.
P2Y7 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LTB4R-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LTB4R abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LTB4R-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LTB4R-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.