Plasmide Double Nickase (m) P2Y4: sc-425395-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) P2Y4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide P2Y4 Double Nickase (m) et le plasmide P2Y4 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant P2ry4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) P2Y4 | sc-425395-NIC | 20 µg | $410.00 |
P2ry4 code le récepteur murin P2Y4, un récepteur purinergique couplé aux protéines G (GPCR) activé par des nucléotides extracellulaires, qui se couple principalement à Gq/11 pour stimuler la signalisation via la phospholipase C. La mobilisation du calcium en aval et les voies dépendantes de la PKC relient P2Y4 à la régulation du transport ionique épithélial, des sécrétions muqueuses et de la contractilité du muscle lisse, avec des rôles supplémentaires dans la signalisation des cellules immunitaires et l’homéostasie tissulaire. La signalisation purinergique des GPCR interagit avec les cascades inflammatoires, la fonction de barrière et les réponses au stress métabolique, faisant de P2ry4 une cible pertinente pour étudier la communication médiée par les nucléotides dans la biologie des voies aériennes, du tractus gastro-intestinal et du système vasculaire. Une activité dérégulée des récepteurs P2Y a été associée à des phénotypes inflammatoires et fibrosants dans de multiples systèmes d’organes, ce qui soutient l’exploration mécanistique de P2ry4 dans des modèles pertinents pour la maladie.
P2Y4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus P2ry4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de P2ry4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de P2ry4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de P2ry4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.