P2Y12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417999

Übersicht

P2RY12 kodiert den purinergen Rezeptor P2Y12, einen Gi-gekoppelten GPCR, der extrazelluläres ADP erkennt, um die cAMP-Signalübertragung zu dämpfen und über nachgeschaltete PI3K/AKT- und Integrin-Signalwege die Thrombozytenaktivierung, -aggregation und Thrombusstabilisierung zu koordinieren. Über die Hämostase hinaus ist P2Y12 ein charakteristischer Marker homeostatischer Mikroglia und moduliert als Antwort auf Nukleotide Chemotaxis, Prozessmotilität und neuroimmunologische Überwachung. Eine veränderte P2RY12-Aktivität oder -Expression wurde mit einer abnormalen Thrombozytenreaktivität sowie mit Zustandsveränderungen der Mikroglia in neuroinflammatorischen und neurodegenerativen Kontexten in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen P2RY12 zu einem nützlichen Ziel, um nukleotidgetriebene Signalwege, Zell-Zell-Kommunikation und die Immun-Gefäß-Wechselwirkung zu untersuchen.

Das P2Y12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des P2RY12-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des P2RY12-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von P2RY12 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die P2Y12-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von P2RY12-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der P2Y12-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf P2RY12-Exone abzielen, die für die P2Y12-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere P2RY12-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom P2Y12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom P2Y12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des P2RY12-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das P2Y12 HDR-Plasmid (h) und P2Y12 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von P2RY12-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten P2RY12-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.