P2X6 Lentiviral Activation Particles (h): sc-416264-LAC

P2RX6 kodiert den P2X6-Rezeptor, einen durch ATP gesteuerten Kationenkanal der purinergen P2X-Familie, der zu einem schnellen Na⁺- und Ca²⁺-Einstrom und der nachgeschalteten Membrandepolarisation in erregbaren und nicht erregbaren Zellen beiträgt. P2X6 kann sich als funktionelle Untereinheit in heteromeren P2X-Rezeptorkomplexen zusammenlagern und dabei Rezeptor-Trafficking, Kinetik und ATP-Empfindlichkeit mitprägen. Über die Regulation der intrazellulären Calcium-Signalübertragung beeinflusst P2X6 Signalwege, die mit Neurotransmission, neuroimmuner Kommunikation und reizinduzierten Entzündungsantworten verknüpft sind. Eine dysregulierte purinerge Signalgebung unter Beteiligung von Mitgliedern der P2X-Familie wurde mit neurologischen und entzündlichen Krankheitsmechanismen in Verbindung gebracht, wodurch P2RX6 ein nützliches Ziel für die Aufklärung ATP-getriebener Signalnetzwerke ist.

P2X6 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente P2RX6-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

P2X6 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der P2RX6-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen P2X6-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen P2RX6-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.