p22-phox Double Nickase Plasmid (h): sc-400325-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das p22-phox Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- p22-phox Double-Nickase-Plasmid (h) und p22-phox Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CYBA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: p22-phox: sc-271968
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
p22-phox Double Nickase Plasmid (h) | sc-400325-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
p22-phox Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400325-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYBA kodiert p22-phox, eine membranüberspannende Untereinheit des phagozytären NADPH-Oxidase-(NOX2-)Komplexes, die für den korrekten Zusammenbau und die Stabilisierung des katalytischen gp91-phox/NOX2-Kerns sowie der zugehörigen zytosolischen Faktoren erforderlich ist. Indem p22-phox den Elektronentransfer auf molekularen Sauerstoff unterstützt, ermöglicht es eine regulierte Bildung reaktiver Sauerstoffspezies (ROS), die zur antimikrobiellen Abwehr, zur Redox-Signalübertragung und zu Entzündungsreaktionen beiträgt. CYBA interagiert zudem mit anderen Enzymen der NOX-Familie und ist damit in breitere ROS-abhängige Signalwege eingebunden, die die Endothelfunktion, angeborene Immun-Signale und Reaktionen auf oxidativen Stress beeinflussen. Eine genetische oder funktionelle Störung von CYBA ist mit einem beeinträchtigten oxidativen Burst-Phänotyp assoziiert und wurde im Zusammenhang mit Immundefizienz, chronischer Entzündung und ROS-getriebenen Mechanismen der Gewebeschädigung untersucht.
p22-phox Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CYBA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CYBA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CYBA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CYBA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.