p19 INK4D/CDKN2D Double Nickase Plasmid (h): sc-401761-NIC

CDKN2D kodiert p19^INK4D, einen cyclinabhängigen Kinaseinhibitor, der bevorzugt an CDK4 und CDK6 bindet, um die cyclin‑D‑abhängige Phosphorylierung von RB1 zu begrenzen und den G1/S‑Checkpoint durchzusetzen. Durch die Drosselung der E2F‑getriebenen Transkription integriert p19^INK4D antiproliferative Signale mit dem Austritt aus dem Zellzyklus und Differenzierungsprogrammen, unter anderem in hämatopoetischen und neuralen Zelllinien. Die Funktion von CDKN2D überschneidet sich mit mitogenem RAS–MAPK‑Signalweg und stressresponsiven Signalwegen, die auf CDK‑Aktivität und Checkpoint‑Kontrolle konvergieren. Eine veränderte Regulation der INK4‑Familie und von Komponenten des RB‑Signalwegs ist in vielen krankheitsrelevanten Zellmodellen häufig mit fehlregulierter Proliferation verbunden, was CDKN2D zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Zellzykluskontrolle und von Mechanismen der Wachstumssuppression macht.

p19 INK4D/CDKN2D Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDKN2D-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDKN2D abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDKN2D-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDKN2D-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.