P/Q-type Ca++ CP α1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419400
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- P/Q-type Ca++ CP α1A Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im P/Q-type Ca++ CP α1A-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: P/Q-type Ca++ CP α1A: sc-390004
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
P/Q-type Ca++ CP α1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-419400 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Cacna1a kodiert die porenbildende α1A‑Untereinheit des P/Q‑Typs spannungsabhängigen Calciumkanals (CaV2.1), einen wichtigen Weg für den aktivitätsabhängigen Ca2+-Einstrom in Neuronen. CaV2.1 koppelt die Depolarisation der Membran an die Exozytose synaptischer Vesikel und prägt über Ca2+-abhängige Signalwege die Wahrscheinlichkeit der Neurotransmitterfreisetzung, die Kurzzeitplastizität und die Erregbarkeit neuronaler Schaltkreise. Die Kanalfunktion ist in ein Netzwerk präsynaptischer Active‑Zone‑Proteine und nachgeschalteter Ca2+-Sensoren eingebunden, die Andocken und Fusion von Vesikeln regulieren. Genetische und funktionelle Störungen von CACNA1A/CaV2.1 wurden mit neurologischen Phänotypen in Verbindung gebracht, die mit veränderter synaptischer Transmission und Instabilität neuronaler Netzwerke einhergehen, was das Gen zu einem wichtigen Ziel für mechanistische Studien der Neurophysiologie macht.
Das P/Q-type Ca++ CP α1A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cacna1a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cacna1a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cacna1a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die P/Q-type Ca++ CP α1A-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cacna1a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der P/Q-type Ca++ CP α1A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Cacna1a-Exone abzielen, die für die P/Q-type Ca++ CP α1A-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cacna1a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom P/Q-type Ca++ CP α1A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom P/Q-type Ca++ CP α1A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cacna1a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das P/Q-type Ca++ CP α1A HDR-Plasmid (m) und P/Q-type Ca++ CP α1A HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cacna1a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cacna1a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.