Plasmide CRISPR d'Activation (h) Oxytocin-R: sc-400641-ACT

Le gène humain OXTR code le récepteur de l’ocytocine (Oxytocin-R), un RCPG de classe A qui se couple principalement à Gq/11 pour stimuler la signalisation IP3/DAG dépendante de la PLCβ, la mobilisation intracellulaire de Ca²⁺ et l’activation de la PKC. La signalisation d’OXTR influence les interactions entre les voies MAPK/ERK et PI3K-AKT, façonnant des programmes transcriptionnels qui régulent la contractilité du muscle lisse, la cognition sociale, la réactivité au stress et la communication neuroendocrinienne. Dans les tissus périphériques, OXTR contribue à la physiologie de l’utérus et des glandes mammaires, tandis que dans le SNC il module la plasticité synaptique et les comportements à l’échelle des circuits. Une expression ou une signalisation d’OXTR dérégulée a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques, notamment des traits liés au spectre de l’autisme, des comportements liés à l’anxiété et une altération de l’attachement social, ce qui étaye des études mécanistiques dans des modèles cellulaires pertinents.

Oxytocin-R Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de OXTR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Oxytocin-R Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus OXTR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription OXTR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Oxytocin-R. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus OXTR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Oxytocin-R au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Oxytocin-R dans les cellules tumorales présentant une expression de OXTR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.