OTUD2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432624

Übersicht

Yod1 kodiert OTUD2, ein Deubiquitinierungsenzym der OTU-Familie, das Ubiquitin-Ketten hydrolysiert und so Protein-Stabilität sowie die Stärke von Signalübertragungen reguliert. OTUD2 ist an der ubiquitinabhängigen Kontrolle der Proteostase und stressresponsiver Signalwege beteiligt, darunter entzündliche und angeborene Immunnetzwerke, in denen Ubiquitinierung die Aktivierung und Beendigung von Signalwegen fein abstimmt. Durch die Umgestaltung von Ubiquitin-Signalen kann OTUD2 Entscheidungen über das Zellüberleben, DNA-Schadensantworten und Transkriptionsprogramme beeinflussen, die mit der zellulären Homöostase verknüpft sind. Eine fehlregulierte Ubiquitin-„Editierung“ wird in der Krebsbiologie wie auch bei immunvermittelten Krankheitsmechanismen mitbeteiligt, wodurch Yod1/OTUD2 einen nützlichen Knotenpunkt für die Analyse von Signalwegen in Mausmodellen darstellt.

Das OTUD2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Yod1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Yod1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Yod1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die OTUD2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Yod1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der OTUD2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Yod1-Exone abzielen, die für die OTUD2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Yod1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom OTUD2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom OTUD2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Yod1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das OTUD2 HDR-Plasmid (m) und OTUD2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Yod1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Yod1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.