ORNT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422074

Übersicht

Slc25a15 kodiert den mitochondrialen Ornithintransporter ORNT1, ein Mitglied der SLC25‑Carrier-Familie, der den Austausch von Ornithin über die innere Mitochondrienmembran vermittelt. In der Maus unterstützt ORNT1 den Harnstoffzyklus, indem er mitochondriales Ornithin für die Carbamoylierung bereitstellt und den Citrullin/Ornithin‑Fluss im Zusammenhang mit der Stickstoffentsorgung und dem Aminosäurekatabolismus ermöglicht. Diese Transportaktivität verknüpft den mitochondrialen Stoffwechsel mit der zytosolischen Stickstoffverarbeitung und beeinflusst Arginin- und polyaminbezogene metabolische Netzwerke. Eine Dysregulation des Ornithintransports und des Harnstoffzyklus‑Durchsatzes ist mit hyperornithinämieassoziierten metabolischen Phänotypen verbunden und kann zelluläre Reaktionen auf Stickstoffstress beeinflussen.

Das ORNT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Slc25a15-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Slc25a15-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Slc25a15 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ORNT1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Slc25a15-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ORNT1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Slc25a15-Exone abzielen, die für die ORNT1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Slc25a15-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ORNT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ORNT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Slc25a15-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ORNT1 HDR-Plasmid (m) und ORNT1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Slc25a15-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Slc25a15-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.