Plasmide CRISPR d'Activation (h) OGG1/2: sc-401130-ACT

OGG1 humain code la DNA glycosylase 8‑oxoguanine, une enzyme clé de la réparation par excision de base (BER) qui reconnaît et excise la 8‑oxoG et des lésions oxydatives apparentées afin de prévenir les transversions G:C→T:A lors de la réplication de l’ADN. Les isoformes OGG1/2 contribuent au maintien des génomes nucléaire et mitochondrial, reliant les réponses au stress oxydant à la stabilité du génome, à la fidélité de la réplication et au contrôle du cycle cellulaire. Par sa coordination avec des facteurs BER en aval tels qu’APEX1, POLβ et XRCC1, l’activité d’OGG1 influence l’accumulation de mutations et la régulation transcriptionnelle au niveau de la chromatine endommagée. Des altérations de la fonction ou de l’expression d’OGG1 ont été associées à une augmentation des dommages oxydatifs de l’ADN et à des signatures mutationnelles pertinentes pour la biologie des cancers, la neurodégénérescence et la physiopathologie inflammatoire.

OGG1/2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de OGG1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OGG1/2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus OGG1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription OGG1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OGG1/2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus OGG1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OGG1/2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OGG1/2 dans les cellules tumorales présentant une expression de OGG1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.