Plásmido Doble Nickase (h) Oct3/4: sc-410951-NIC

POU5F1B codifica un factor de transcripción humano con dominio POU relacionado con Oct3/4, implicado en la regulación de programas transcripcionales asociados a la pluripotencia y del estado de la cromatina. La actividad de la familia Oct3/4 se integra con redes centrales de “stemness” y circuitos transcripcionales que gobiernan la autorrenovación, el compromiso de linaje y la reprogramación, con efectos posteriores sobre el control del ciclo celular y la remodelación epigenética. Se ha descrito expresión aberrante o desregulación de POU5F1B en múltiples contextos tumorales, y se estudia en relación con programas transcripcionales oncogénicos, la plasticidad celular y fenotipos adaptativos al estrés. Por ello, este gen es relevante para desentrañar mecanismos de estados tipo célula madre, barreras a la diferenciación y biología de enfermedades impulsada por factores de transcripción en modelos celulares humanos.

Oct3/4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus POU5F1B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de POU5F1B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de POU5F1B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con POU5F1B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.