Plásmido CRISPR de Activación (h) OATP8: sc-402371-ACT

SLCO1B3 codifica el polipéptido transportador de aniones orgánicos humano OATP8 (OATP1B3), un transportador de entrada de membrana que media la captación, independiente de sodio, de una amplia variedad de aniones orgánicos endógenos y xenobióticos. Es altamente relevante para los procesos de transporte hepático y epitelial que determinan la exposición celular a ácidos biliares, conjugados de bilirrubina, metabolitos de hormonas esteroideas y numerosos compuestos de tipo farmacológico, influyendo así en las vías de desintoxicación y depuración metabólica. La expresión alterada de SLCO1B3 o su deslocalización pueden remodelar la disponibilidad intracelular de sustratos y la señalización posterior vinculada a la respuesta a xenobióticos, el manejo del estrés oxidativo y la homeostasis metabólica. Se han descrito actividad anómala de OATP1B3 y patrones de expresión ectópica en múltiples tipos de cáncer y trastornos asociados al hígado, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de fenotipos regulados por transportadores y de la variabilidad farmacogenómica.

OATP8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLCO1B3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OATP8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLCO1B3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLCO1B3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OATP8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLCO1B3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OATP8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OATP8 en células tumorales con expresión de SLCO1B3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.