NPY4-R Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406230

Descripción general

NPY4R codifica el receptor Y4 del neuropéptido Y (NPY4-R), un GPCR acoplado a Gi/o que se activa preferentemente por el polipéptido pancreático y modula la señalización de AMPc, la actividad de canales iónicos y las vías MAPK/ERK aguas abajo. NPY4-R se expresa en tejidos periféricos y en regiones selectas del SNC, conectando señales neuroendocrinas con la regulación de la conducta alimentaria, el balance energético, la motilidad gastrointestinal y el control autonómico. La activación del receptor influye en la excitabilidad celular y en programas secretorios mediante la inhibición de la adenilil ciclasa y la señalización mediada por βγ. Las alteraciones en la señalización de NPY4R se han estudiado en el contexto de la fisiología metabólica, rasgos relacionados con la obesidad y la regulación funcional gastrointestinal, proporcionando un punto de entrada mecanístico para investigar circuitos homeostáticos impulsados por neuropéptidos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NPY4-R (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NPY4R en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NPY4R junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NPY4R tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NPY4-R.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NPY4R para la investigación de la señalización de NPY4-R, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NPY4R críticos para la función de NPY4-R
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NPY4R para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NPY4-R CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NPY4-R CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NPY4R. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NPY4-R (h) y el plásmido HDR NPY4-R (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NPY4R para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NPY4R definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.