NPAS4 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-402373-LAC

NPAS4 (proteína 4 do domínio PAS neuronal) é um fator de transcrição PAS do tipo hélice–alça–hélice básico, dependente da atividade, que acopla a sinalização de cálcio a programas transcricionais rápidos em neurônios. Ele regula o equilíbrio entre excitação e inibição ao controlar redes gênicas envolvidas na formação de sinapses, no escalonamento sináptico inibitório e na sinalização por neurotrofinas, incluindo vias ligadas à transcrição responsiva ao BDNF. O NPAS4 está implicado na plasticidade neuronal, na aprendizagem e memória e em circuitos responsivos ao estresse, e alterações na sua regulação têm sido associadas a fenótipos relevantes para doenças neuropsiquiátricas e neurodegenerativas. Como regulador transcricional sensível ao contexto, é amplamente utilizado para investigar a expressão gênica induzida por estímulos e adaptações em nível de circuito em modelos neuronais humanos.

As Partículas de Ativação Lentivirais NPAS4 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de NPAS4 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais NPAS4 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição NPAS4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de NPAS4. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo NPAS4 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.