NPAS4 Lentiviral Activation Particles (h): sc-402373-LAC

NPAS4 (neuronal PAS domain protein 4) ist ein aktivitätsabhängiger bHLH-PAS-Transkriptionsfaktor (basic helix–loop–helix PAS), der Kalziumsignalgebung mit schnellen neuronalen Transkriptionsprogrammen koppelt. Er reguliert das Erregungs-Hemmungs-Gleichgewicht, indem er Gen-Netzwerke steuert, die an der Synapsenbildung, der inhibitorischen synaptischen Skalierung und der Neurotrophin-Signalgebung beteiligt sind, einschließlich Signalwegen, die mit BDNF-abhängiger Transkription verknüpft sind. NPAS4 ist an neuronaler Plastizität, Lernen und Gedächtnis sowie stressreaktiven Schaltkreisen beteiligt, und eine veränderte NPAS4-Regulation wurde mit für neuropsychiatrische und neurodegenerative Erkrankungen relevanten Phänotypen in Verbindung gebracht. Als kontextsensitiver Transkriptionsregulator wird es häufig eingesetzt, um stimulusgetriebene Genexpression und Anpassungen auf Schaltkreisebene in humanen neuronalen Modellen zu untersuchen.

NPAS4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente NPAS4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

NPAS4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der NPAS4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen NPAS4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen NPAS4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.