Notum CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409374

Übersicht

NOTUM kodiert Notum, eine sezernierte Carboxylesterase, die die Wnt-Signalübertragung negativ reguliert, indem sie die Palmitoleat-Modifikation an Wnt-Liganden deacetyliert. Dadurch wird die Ligand–Rezeptor-Interaktion und die nachgeschaltete, β‑Catenin‑abhängige Transkription begrenzt. Indem Notum die Ausbildung von Wnt-Gradienten und die Signaldauer mitprägt, trägt es zur Entwicklungs­musterung, zur Gewebehomöostase und zur Regulation von Stammzellnischen bei. Eine veränderte NOTUM-Aktivität wurde mit einer fehlregulierten Ausgabe des Wnt-Signalwegs in verschiedenen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, darunter die Krebsbiologie sowie Erkrankungen mit aberranter epithelialer Erneuerung und Differenzierung. Als löslicher Wnt-Antagonist ist Notum zudem relevant für Studien zur extrazellulärmatrixnahen Signalübertragung und zur parakrinen Kontrolle der Signalwegaktivierung.

Das Notum CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NOTUM-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NOTUM-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NOTUM nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Notum-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NOTUM-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Notum-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NOTUM-Exone abzielen, die für die Notum-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NOTUM-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Notum CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Notum CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NOTUM-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Notum HDR-Plasmid (h) und Notum HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NOTUM-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NOTUM-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.