Notch 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421933

Übersicht

Notch3 kodiert den Notch-3-Rezeptor, ein einschichtiges Transmembranprotein, das juxtakrine Signalübertragung vermittelt und so kontextabhängig Entscheidungen über Zellschicksal, Proliferation und Differenzierung steuert. Nach Ligandenbindung ermöglicht die Prozessierung des Rezeptors die Freisetzung der intrazellulären Notch-Domäne, die in den Zellkern transloziert und dort gemeinsam mit CSL/RBPJ und Koaktivatoren Transkriptionsprogramme reguliert. In Mausgeweben ist Notch3 besonders eng mit der Biologie vaskulärer glatter Muskelzellen/Perizyten verknüpft und trägt zur Gefäßreifung, Gewebehomöostase und Stressantworten bei. Eine fehlregulierte Notch3-Signalgebung wurde mit aberranten Differenzierungszuständen und vaskulärer Pathologie in Verbindung gebracht, wodurch Notch3 ein relevanter Knotenpunkt für die Untersuchung von Crosstalk im Notch-Signalweg und der Steuerung von Zelllinienprogrammen ist.

Das Notch 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Notch3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Notch3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Notch3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Notch 3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Notch3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Notch 3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Notch3-Exone abzielen, die für die Notch 3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Notch3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Notch 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Notch 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Notch3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Notch 3 HDR-Plasmid (m) und Notch 3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Notch3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Notch3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.