Plasmide CRISPR d'Activation (h) NORRIN: sc-405323-ACT

Le gène humain **NDP** code la protéine sécrétée **NORRIN**, un ligand Wnt atypique qui se lie à **Frizzled-4** et **LRP5/6** pour activer la signalisation canonique **Wnt/β-caténine**. Cette voie soutient le développement et le maintien du réseau vasculaire de la rétine et de l’oreille interne, en influençant les interactions endothélium–péricytes, l’intégrité des barrières et l’homéostasie neurovasculaire. Une dérégulation de la signalisation **NDP/NORRIN** est associée à des vitréorétinopathies héréditaires et à des anomalies vasculaires rétiniennes, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte du remodelage angiogénique et des réseaux de signalisation du neurodéveloppement. La modulation expérimentale de l’expression de **NDP** constitue une approche accessible pour disséquer les interactions entre voies Wnt, les programmes transcriptionnels en aval de **β-caténine** et les réponses spécifiques aux types cellulaires dans des modèles oculaires et vasculaires.

NORRIN Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NDP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NORRIN Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NDP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NDP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NORRIN. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NDP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NORRIN au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NORRIN dans les cellules tumorales présentant une expression de NDP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.