Nodal Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401439

Descripción general

NODAL codifica Nodal, un morfógeno secretado de la superfamilia TGF-β que señaliza principalmente a través de los receptores de Activina y de SMAD2/3 para regular la especificación del mesendodermo, el patrón izquierda–derecha y el mantenimiento de programas de pluripotencia durante el desarrollo temprano. En células humanas, Nodal se integra con reguladores de retroalimentación como LEFTY y con la comunicación cruzada con las vías WNT y FGF para moldear decisiones de linaje, transiciones epitelio–mesénquima y redes transcripcionales que controlan estados de células madre. Se ha informado de una expresión aberrante de NODAL en múltiples contextos tumorales y se estudia con frecuencia por su asociación con fenotipos invasivos, plasticidad celular y circuitos de señalización vinculados a la resistencia. Como nodo de la vía, Nodal se investiga habitualmente en biología del desarrollo, biología del cáncer y modelos de diferenciación de células madre.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Nodal (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NODAL en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NODAL junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NODAL tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Nodal.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NODAL para la investigación de la señalización de Nodal, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NODAL críticos para la función de Nodal
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NODAL para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Nodal CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Nodal CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NODAL. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Nodal (h) y el plásmido HDR Nodal (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NODAL para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NODAL definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.