Plasmide CRISPR d'Activation (h) NOD2: sc-400668-ACT

Le NOD2 humain (nucleotide-binding oligomerization domain-containing protein 2) est un récepteur cytosolique de reconnaissance des motifs qui détecte des fragments de peptidoglycane bactérien, tels que le muramyl-dipeptide, et déclenche la signalisation de l’immunité innée. Lorsqu’il est activé, NOD2 recrute RIPK2 pour stimuler les voies NF-κB et MAPK, modulant l’expression des gènes inflammatoires, les réponses antimicrobiennes et l’homéostasie de la barrière épithéliale. NOD2 interagit également avec des processus liés à l’autophagie et à la détection microbienne dans les cellules myéloïdes et les cellules épithéliales intestinales. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de la signalisation NOD2 sont associées à des interactions hôte–microbiote dérégulées et à des phénotypes inflammatoires, ce qui justifie son étude dans des modèles d’immunité muqueuse et d’inflammation associée aux infections.

NOD2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NOD2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NOD2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NOD2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NOD2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NOD2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NOD2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NOD2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NOD2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NOD2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.