NMNAT-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403839

Descripción general

NMNAT3 codifica la nicotinamida mononucleótido adenililtransferasa 3 (NMNAT-3), una enzima mitocondrial que cataliza el paso final de la biosíntesis de NAD+ a partir de nicotinamida mononucleótido, manteniendo los reservorios organelares de NAD+ necesarios para el metabolismo oxidativo. Al controlar reacciones redox dependientes de NAD+ y apoyar la señalización vinculada a sirtuinas y PARP, NMNAT-3 influye en la homeostasis mitocondrial, las respuestas celulares al estrés y el equilibrio energético. La alteración de la actividad de NMNAT3 se ha asociado con una desregulación del metabolismo de NAD+ y disfunción mitocondrial, procesos implicados en la neurodegeneración, los trastornos cardiometabólicos y la adaptación metabólica de células tumorales. Como nodo mitocondrial de NAD+, NMNAT-3 es relevante para estudios de bioenergética, mantenimiento mitocondrial y vías de señalización acopladas a NAD+.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NMNAT-3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NMNAT3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NMNAT3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NMNAT3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NMNAT-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NMNAT3 para la investigación de la señalización de NMNAT-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NMNAT3 críticos para la función de NMNAT-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NMNAT3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NMNAT-3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NMNAT-3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NMNAT3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NMNAT-3 (h) y el plásmido HDR NMNAT-3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NMNAT3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NMNAT3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.