NMDAζ1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400593

Übersicht

GRIN1 kodiert die essenzielle NR1‑ (NMDAζ1‑)Untereinheit der N‑Methyl‑D‑Aspartat‑(NMDA‑)Rezeptoren, ligandengesteuerter Ionenkanäle, die eine Ca²⁺‑durchlässige exzitatorische Neurotransmission vermitteln. Die NMDA‑Rezeptor‑Signalübertragung integriert glutamaterge Eingänge mit der Membrandepolarisation und reguliert dadurch synaptische Plastizität, Langzeitpotenzierung und aktivitätsabhängige Programme der Genexpression. Über die Kopplung an Gerüstproteine der postsynaptischen Dichte und nachgeschaltete Signalwege wie CaMK/CREB und MAPK/ERK beeinflusst GRIN1 die neuronale Entwicklung, die Reifung von Schaltkreisen sowie Reaktionen auf exzitotoxischen Stress. Veränderungen der GRIN1‑Funktion oder ‑Expression wurden mit neurodevelopmentalen und neuropsychiatrischen Phänotypen, erhöhter Anfallsanfälligkeit und synaptischen Dysfunktionen in Zusammenhang gebracht, die für mehrere Erkrankungen des Nervensystems relevant sind.

Das NMDAζ1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GRIN1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GRIN1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GRIN1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NMDAζ1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GRIN1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NMDAζ1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GRIN1-Exone abzielen, die für die NMDAζ1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GRIN1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NMDAζ1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NMDAζ1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GRIN1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NMDAζ1 HDR-Plasmid (h) und NMDAζ1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GRIN1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GRIN1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.