Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nkx-6.3 (h): sc-407505

Présentation

NKX6-3 code le facteur de transcription à homéoboîte Nkx-6.3, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique de la séquence, impliqué dans les programmes de différenciation épithéliale et le maintien de l’identité régionale dans les tissus gastro-intestinaux. En tant que facteur nucléaire, Nkx-6.3 contribue à façonner des réseaux transcriptionnels qui contrôlent l’engagement de lignée, la prolifération et la maturation, en interaction avec des voies plus larges du développement et du destin cellulaire, incluant des échanges avec la voie Wnt/β-caténine et d’autres cascades de signalisation associées à la différenciation. Une expression ou une activité régulatrice altérée de NKX6-3 a été associée à une perturbation de l’homéostasie muqueuse et a été rapportée dans des études de pathologies gastro-intestinales, ce qui soutient sa pertinence dans des modèles de dysfonction épithéliale et de reprogrammation transcriptionnelle liée à la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nkx-6.3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NKX6-3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NKX6-3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NKX6-3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nkx-6.3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NKX6-3 pour l'étude de la signalisation de Nkx-6.3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NKX6-3 essentiels à la fonction de Nkx-6.3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NKX6-3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Nkx-6.3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Nkx-6.3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NKX6-3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Nkx-6.3 plasmide HDR (h) et le Nkx-6.3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NKX6-3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NKX6-3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.