Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nkx-6.1 (h): sc-401997

Présentation

NKX6-1 code le facteur de transcription à homéoboîte Nkx-6.1, un régulateur clé de la spécification des lignées endocrines pancréatiques et de la maturation des cellules β. Nkx-6.1 coordonne des programmes transcriptionnels qui contrôlent la sécrétion d’insuline, le couplage métabolique stimulé par le glucose et le maintien de l’identité des cellules β, via des réseaux qui recoupent la régulation génique associée à PDX1, NEUROD1 et MAFA. Une expression ou une activité altérée de NKX6-1 a été associée à une diminution de la fonction des cellules β et à une dérégulation de l’homéostasie du glucose, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes liés au diabète et au développement endocrinien. Au-delà de la biologie du pancréas, Nkx-6.1 est utilisé comme marqueur et comme nœud fonctionnel dans des modèles de différenciation explorant l’engagement de lignée et le contrôle transcriptionnel.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nkx-6.1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NKX6-1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NKX6-1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NKX6-1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nkx-6.1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NKX6-1 pour l'étude de la signalisation de Nkx-6.1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NKX6-1 essentiels à la fonction de Nkx-6.1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NKX6-1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Nkx-6.1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Nkx-6.1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NKX6-1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Nkx-6.1 plasmide HDR (h) et le Nkx-6.1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NKX6-1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NKX6-1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.