Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nix: sc-401982-ACT

La BNIP3L (Nix) humaine code une protéine pro-apoptotique associée aux mitochondries, de type BH3-only, qui fonctionne comme récepteur de mitophagie en interagissant avec les protéines de la famille LC3/GABARAP via son motif LIR. Nix intègre le contrôle qualité mitochondrial à la mort cellulaire programmée et à l’adaptation au stress, reliant la signalisation dépendante de l’hypoxie et la dépolarisation mitochondriale à l’élimination sélective des mitochondries endommagées. Elle contribue à la maturation érythroïde via la clairance des mitochondries et peut influencer la reprogrammation métabolique, l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène et la signalisation inflammatoire. Une expression ou un renouvellement dérégulés de BNIP3L/Nix ont été associés à des phénotypes altérés de mitophagie et d’apoptose rapportés en biologie du cancer, dans la neurodégénérescence et dans des modèles de stress cardiovasculaire, soutenant des études mécanistiques du dysfonctionnement mitochondrial.

Nix Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BNIP3L sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nix Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BNIP3L dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BNIP3L, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nix. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BNIP3L natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nix au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nix dans les cellules tumorales présentant une expression de BNIP3L silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.