Plásmido Doble Nickase (m) Nir2: sc-422251-NIC

Pitpnm1 codifica Nir2, una proteína de transferencia de fosfatidilinositol que mantiene la homeostasis de los fosfoinosítidos al intercambiar lípidos entre membranas y sostener los reservorios de fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato en la membrana plasmática. En células de ratón, Nir2 conecta la señalización de la fosfolipasa C inducida por receptores con la reposición de lípidos en los sitios de contacto entre el retículo endoplásmico y la membrana plasmática, lo que influye en la señalización dependiente de calcio, el tráfico de membranas y la dinámica del citoesqueleto. A través de su papel en la regulación del recambio de fosfoinosítidos, Nir2 contribuye a procesos como la migración celular, el crecimiento de neuritas y el transporte vesicular, que son sensibles al flujo de señalización lipídica. La desregulación del metabolismo de fosfoinosítidos y de la función de los sitios de contacto entre membranas es ampliamente relevante para estudios de neurobiología, metabolismo y señalización proliferativa, y ofrece puntos de entrada mecanísticos para modelos de investigación orientados a enfermedades.

Nir2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Pitpnm1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Pitpnm1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Pitpnm1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Pitpnm1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.