NIK CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400620-ACT

MAP3K14 kodiert die NF-κB‑induzierende Kinase (NIK), eine zentrale MAP3K, die den nichtkanonischen NF-κB‑Signalweg antreibt, indem sie die IKKα‑abhängige Prozessierung von p100 (NFKB2) zu p52 fördert und RELB‑abhängige Transkriptionsprogramme reguliert. NIK integriert Signale nachgeschaltet von Rezeptoren wie BAFFR, CD40, LTβR und RANK, um die Lymphorganogenese, die B‑Zell‑Reifung, die Osteoklastendifferenzierung und die Expression inflammatorischer Gene zu steuern. Eine strenge Kontrolle der NIK‑Stabilität und der Signalstärke ist für die Immunhomöostase essenziell; eine Fehlregulation der MAP3K14‑Aktivität wurde mit veränderter NF-κB‑Signalgebung bei immunologischen und entzündlichen Erkrankungen sowie im Kontext hämatologischer Malignome in Verbindung gebracht. Als Signalknoten wird NIK häufig untersucht, um die Kopplung von Rezeptorsignalen an Transkription, Pathway‑Crosstalk und adaptive Stressantworten zu kartieren.

NIK Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAP3K14-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NIK Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAP3K14-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAP3K14-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NIK-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAP3K14-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NIK-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NIK-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAP3K14-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.