Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5: sc-401702-ACT

CHRNA5 code la sous-unité alpha 5 du récepteur nicotinique de l’acétylcholine, un composant accessoire de canaux cationiques hétéromériques activés par ligand qui module l’assemblage du récepteur, la conductance ionique et la cinétique de désensibilisation en réponse à l’acétylcholine et à la nicotine. En façonnant la signalisation cholinergique, CHRNA5 influence la dépolarisation membranaire, la signalisation dépendante du calcium, ainsi que les voies en aval impliquées dans l’excitabilité neuronale et la plasticité synaptique. Des variations génétiques et des modifications d’expression de CHRNA5 ont été associées à une susceptibilité à la dépendance à la nicotine et à des traits liés au tabagisme, et ont été étudiées dans le contexte de la biologie de l’épithélium pulmonaire et de phénotypes neuropsychiatriques. En tant que sous-unité régulatrice, CHRNA5 peut ajuster les réponses du récepteur de manière spécifique au type cellulaire, ce qui la rend pertinente pour des études mécanistiques des circuits cholinergiques et des programmes transcriptionnels dépendants des stimuli.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CHRNA5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CHRNA5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CHRNA5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CHRNA5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 dans les cellules tumorales présentant une expression de CHRNA5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.