Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403376-ACT

CHRNA2は、神経型ニコチン性アセチルコリン受容体（nAChR）のα2サブユニットをコードしています。nAChRはリガンド作動性の陽イオンチャネルで、5量体として集合し、迅速なコリン作動性神経伝達を担います。アセチルコリンまたはニコチンが結合すると、CHRNA2を含む受容体はNa⁺およびCa²⁺の流入を促進し、膜の興奮性や、シナプス可塑性および回路ダイナミクスを形作る活動依存性シグナル伝達経路に影響を与えます。中枢神経系では、nAChRサブユニット組成の変化が神経伝達物質放出や、その下流にあるカルシウム依存性の転写プログラムを調節し得ます。CHRNA2に関わる遺伝学的変化や発現変動は、神経精神疾患および神経発達関連の表現型との関連で検討されており、コリン作動性シグナルの攪乱が疾患に関係する神経ネットワーク機能に関与すると考えられています。

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CHRNA2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CHRNA2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCHRNA2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCHRNA2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCHRNA2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。