Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2: sc-403376-ACT

CHRNA2 code la sous-unité α2 des récepteurs nicotiniques neuronaux de l’acétylcholine (nAChR), des canaux cationiques activés par ligand qui s’assemblent en pentamères pour assurer une neurotransmission cholinergique rapide. Après liaison de l’acétylcholine ou de la nicotine, les récepteurs contenant CHRNA2 induisent un influx de Na⁺ et de Ca²⁺, influençant l’excitabilité membranaire et les voies de signalisation dépendantes de l’activité qui façonnent la plasticité synaptique et la dynamique des circuits. Dans le système nerveux central, une modification de la composition en sous-unités des nAChR peut moduler la libération de neurotransmetteurs et des programmes transcriptionnels en aval dépendants du calcium. Des changements génétiques et d’expression impliquant CHRNA2 ont été étudiés dans le contexte de phénotypes neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux, où des perturbations de la signalisation cholinergique sont impliquées dans des fonctions de réseaux neuronaux pertinentes pour la maladie.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CHRNA2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CHRNA2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CHRNA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CHRNA2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 dans les cellules tumorales présentant une expression de CHRNA2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.